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枯草芽孢桿菌廠家-預混料廠家-豬催肥
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芽孢桿菌廠家:枯草芽孢桿菌原生質體制備工藝

芽孢桿菌廠家:枯草芽孢桿菌原生質體制備工藝

  • 分類:行業資訊
  • 作者:
  • 來源:
  • 發布時間:2021-06-05 12:33

芽孢桿菌廠家:枯草芽孢桿菌原生質體制備工藝

  • 分類:行業資訊
  • 作者:
  • 來源:
  • 發布時間:2021-06-05 12:33
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1.培養枯草芽孢桿菌:取親本菌株T4412和TT2的新鮮斜面,放入裝有液體完全培養基(CM)的試管中,36振蕩培養14小時,將每株菌的1毫升菌液轉移到裝有20毫升液體完全培養基的250毫升錐形瓶中,36振蕩培養3小時,使細胞生長到對數前期,加入25u/毫升青霉素,使其濃度為0.3u/。枯草芽孢桿菌廠家

枯草芽孢桿菌原生質體制備工藝

2.收集細胞:取10毫升菌液,以4000轉/分鐘離心10分鐘,棄去上清液,將枯草芽孢桿菌細菌懸浮于磷酸鹽緩沖液中,離心。用這種方法洗兩次,將細菌懸浮在10毫升的水中,每毫升含有約108,109個活細菌。枯草芽孢桿菌廠家

3.細菌總數的測定:每份取0.5毫升細菌溶液,枯草芽孢桿菌用生理鹽水稀釋,取1毫升10-5、10-6和10-7(每次稀釋用兩個平板),倒入完整的培養基,培養36小時后計數。這是未經酶處理的細菌總數。枯草芽孢桿菌廠家

4.分離壁:枯草芽孢桿菌從兩個親本菌株中取出5mL菌懸液,加入濃度為100微克/毫升的5mL溶菌酶溶液,混合均勻,在36個水浴中保溫30分鐘,定期取樣,通過顯微鏡檢查觀察原生質體的形成,當95%以上的細胞變成球形原生質體時,以4000轉/分鐘離心10分鐘,棄去上清。枯草芽孢桿菌廠家

5.剩余菌數的測定:取原生質體懸液0.5mL,用無菌水稀釋,枯草芽孢桿菌使原生質體裂死。取0.1毫升10-2、10-3和10-4稀釋液,鋪在完整的培養基平板上,培養2448小時。生長的菌落應該是未被酶裂解的剩余細胞。計算酶處理后的剩余細胞數,并分別計算兩親本菌株的原生質體形成率。原生質體形成率:未經酶處理的細菌總數——酶處理后剩余細胞數。枯草芽孢桿菌廠家


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